1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。

2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）去除颗粒。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。

3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。

6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.

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结合物的制备
　　酶标记抗体的制备方法主要有两种，即戊二醛交联法和过碘酸盐氧化法。
　　（1）戊二醛交联法：戊二醛是一种双功能团试剂，它可以使酶与蛋白质的氨基通过
它而联结。碱性磷酸一般用此法进行标记。交联方法一步法、两步法两种。在一步法中戊
二醛直接加入酶与抗体的混合物中，反应后即得酶标记抗体。
　　ELISA中常用的酶一般都用此法交联。它具有操作简便、有效（结合率达60%-70%）
和重复性好等优点。缺点是交联反应是随机的，酶与抗体交联时分子间的比例不严格，结
合物的大小也不均一，酶与酶，抗体与抗体之间也有可能交联，影响效果。在两步法中，
先将酶与戊二醛作用，透析除去多余的戊二醛后，再与抗体作用而形成酶标抗体。也可先
将抗体与戊二醛作用，再与酶联结。两步法的产物中大部分的酶与蛋白质是以1:1的比
例结合的，较一步法的酶结合物更有助于本底的改善以提高敏感度，但其偶联的有效率较
一步法低。
　　（2）过碘酸盐氧化法：本法只适用于含糖量较高的酶。辣根过氧化物酶的标记常用
此法。反应时，过碘酸钠将HRP分子表面的多糖氧化为醛基很活泼，可与蛋白质上的氨基
形成Schiff氏碱而结合。酶标记物按克分子比例联结，其比例为：酶/抗体=1-2/1。此
法简便有效，一般认为是HRP可取的标记方法，但也有人认为所有试剂较为强烈，各批
实验结果不易重演。