人热休克蛋白60检测试剂盒辣根过氧化物酶底物ABTS水溶性HRP底物，在过氧化物酶的作用下产生绿色终产物。该绿色产物在410nm及650nm具有两个主要的吸收峰。OPD和HRP反应时生成桔黄色的产物，在492nm时吸收zui大。OPD易溶于底物缓冲液，如Stable Peroxidase Substrate Buffer。

TMB被过氧化氢氧化时（由HRP催化）可形成蓝色产物，主要吸收峰在370 nm和652nm。加入硫酸或磷酸后，它会变成黄色，zui大吸收峰为450 nm。TMB灵敏度很高，达到相同的检测灵敏度需要的量比ABTS少，但这也可能产生较高的背景，所以要求使用较少的蛋白或较低的抗体浓度。

人热休克蛋白60检测试剂盒空白和对照的设置：

空白1：不加抗原，只加包被液。（检测一抗的非特异性吸附）

空白2：不加一抗，用稀释液代替。（检测二抗的非特异性吸附）

阴性对照：不加一抗，用免疫前血清代替。

结果判定：

标本/阴性对照比值：在得出标本（S）和阴性对照（N）的A值后，计算S/N值。（S＝样品OD-空白OD，N＝阴性对照OD-空白OD）

P/N > 2的判为阳性，人热休克蛋白60检测试剂盒颜色淡的阳性孔的稀释倍数即为抗体的效价。

空白对照一个是包被空白，只加包被液，不加抗原，这是检测一抗 的非特异性吸附的。空白2也很合理，不过阴性对照的血清，准备用多大稀释度的？人热休克蛋白60检测试剂盒这个要做几个稀释度，那个浓度的非特异性媳吸附zui小，就固定用那个浓度。