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凝胶填料Sephadex LH-20全称为：羟丙基葡聚糖凝胶。常用商品凝胶的一种（另一种为交联葡聚糖凝胶。Sephadex LH-20为Sephadex G-25（葡聚糖凝胶按交联度分类的其中一种商品型号）经羟丙基化处理后得到的产物，此时，葡聚糖凝胶分子中的葡萄糖部分将与羟丙基结合成下列醚键形式： -OH → -OCH2CH2CH2OHSephadex G) 与Sephadex G比较，SephadexLH-20分子中 -OH 基总数虽无改变，但碳原子数所占比例却相对增加了，所以Sephadex LH-20不仅可在水中应用，也可在性有机溶剂或他们与水组成的混合溶剂中膨润使用。 Sephadex LH20是一种价钱较高的填料，特点： 1、适合用有机溶剂分离嗜脂性分子，可以非常经济地大规模制备各种天然产物 2、结合凝胶过滤、分配色谱及吸附性层析于一身，分离结构非常相近的分子 3、载量可高达300mg样品/ml凝胶，少需要再生，分离效果可保持十几年不变。 SephadexLH20 的原理 Sephadex LH20的分离原理是根据分子大小，主要有两方面：以凝胶过滤作用为主，兼具反相分配的作用（在反相溶剂中）。因为凝胶过滤作用，所以大分子的化合物保留弱，先被洗脱下来，小分子的化合物保留强，后出柱（具体原理可参见分子筛层析）。如果使用反相溶剂洗脱， Sephadex LH20对化合物还起反相分配的作用，所以性大的化合物保留弱，先被洗脱下来，性小的化合物保留强，后出柱。如果使用正相溶剂洗脱，这主要靠凝胶过滤作用来分离。 Sephadex LH20 洗脱溶剂 Sephadex LH20 洗脱溶剂因分为两类：反相和正相两种。用得多的是反相溶剂洗脱，以甲醇/水系统为常见，先用水，逐渐增加甲醇比例，后用甲醇冲柱。正相系统以氯仿/甲醇为常见，先用50%氯仿/甲醇，逐渐增加甲醇比例，后用甲醇冲柱。 样品的处理和洗脱溶剂的选择 如果样品性大，就选用反相溶剂洗脱（甲醇/水），样品用少体积的甲醇/水（尽可能甲醇少一些）溶解，过滤后，湿法上样（一定要滤喔！要是把Sephadex LH20 堵啦，就得将Sephadex LH20 的柱头部分弃去，很心痛呀）。如果样品性小，这选用正相溶剂洗脱（氯仿/甲醇），样品用少体积的氯仿/甲醇溶解，过滤后，湿法上样。 分离的技巧 （1） 分离时流速不可太快，切切不可心急，所谓欲速则不达；接馏分时可开全速，节省时间。 （2）柱子尽可能长， Sephadex LH20 柱长的增加将大地改善分离，所不要吝惜填料，宁可将填料全装在一根大柱子中，不要将填料装成几根小柱。所谓集中兵力，打击敌人。 （3） 馏分一定要接的细，可1/10，或1/20 个保留体积接成一馏分。 （4） 洗脱体积一般为2-3个保留体积，对特殊保留强的化合物，可洗脱5个保留体积。 （5）鞣质成分死吸附严重，如不在乎填料者，可用Sephadex LH20 分鞣质 （6）Sephadex LH20 对黄酮类成分的分离效果佳，方法很成型，有大量文献参考。 （7）填料反复使用，每次用完，一般可用甲醇将柱子洗干净，然后用下一次分离的起步溶剂将甲醇替换出来，待用。暂时不用试可以水洗→含水醇洗（醇的浓度逐步递增）→醇洗，后泡在醇中贮于磨口瓶中备用。如长期不用时，可在以上处理基础上，减压抽干，再用少量乙醚洗净抽干，室温充分挥散至无醚味后，60～80°C干燥后保存。 LH-20 葡聚糖凝胶Sephadex LH-20
2024-05-15 09:55 点击:792
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