发送询价
植物中脂氧合酶(Lipoxygenase, LOX)活性测定试剂盒说明书 紫外分光光度法 植物中脂氧合酶(LOX)测试盒
注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
货号:BC0320
规格:50 管/48 样
产品内容:
试剂一:液体×1瓶,4℃保存。
试剂二:液体×1瓶,4℃保存。
试剂三:粉剂×1瓶,4℃保存。临用前加入 5mL试剂二,充分溶解。
产品说明: 植物中脂氧合酶(LOX)测试盒
LOX广泛存在于植物组织中,催化不饱和脂肪酸氧化反应,导致膜脂过氧化。在植物的生长发育、成熟衰老及逆境胁迫过程中具有重要作用。 LOX 催化亚油酸氧化,氧化产物在 234nm 处有特征吸收峰;测定 234nm 吸光度增加速率,来计算 LOX活性。
自备仪器和用品:
研钵、冰、台式离心机、紫外分光光度计、1mL石英比色皿、可调式移液枪和蒸馏水。
植物中脂氧合酶(LOX)测试盒
操作步骤:
一、粗酶液提取:
按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 试剂一)进行冰浴匀浆。16000g,4℃离心 20min,取上清置冰上待测。
二、测定:
1. 分光光度计预热30 min,调节波长到 234 nm,蒸馏水调零。
2. 试剂二在25℃水浴中预热30 min。
3. 空白管:依次在 1mL石英比色皿中加入100µL蒸馏水、800µL试剂二和 100µL试剂三,迅速混匀后于234nm 比色,记录 15s 和75s 的吸光值,分别记为 A1和 A2。
4. 测定管:依次在1mL石英比色皿中加入100µL上清液、800µL试剂二和 100µL试剂三,迅速混匀后于234nm 比色,记录 15s 和75s 的吸光值,分别记为 A3和 A4。
注意:空白管只需测定一次。
三、LOX活性计算公式:
(1)按照蛋白浓度计算
活性单位定义:25℃中每毫克蛋白每分钟催化吸光值变化 0.001 个单位为 1 个酶活单位。 LOX (U/mg prot) = [(A4-A3)-(A2-A1)]×V 反总÷(Cpr×V样)÷T×1000 = 10000×[(A4-A3)-(A2-A1)]÷Cpr
(2)按照样本质量计算
活性单位定义:25℃中每克组织每分钟催化吸光值变化 0.001 个单位为 1 个酶活单位。
LOX (U/g) = [(A4-A3)-(A2-A1)]×V反总÷(W×V样÷V样总)÷T×1000
= 10000×[(A4-A3)-(A2-A1)]÷W
Cpr:上清液蛋白浓度,mg/mL,需另外测定,建议使用本公司 BCA蛋白质含量测定试剂盒;
V 样:加入反应体系中上清液体积,100µL=0.1mL;V 反总:反应总体积,1mL;V 样总:上清液总体积,1mL;W:样本质量,g;T:反应时间,1min。
注意事项:
1. 试剂三易自发氧化,从而导致空白管测定值偏高,必须临用前配制,并且当天使用完毕。
2. 样品处理等过程均需要在冰上进行,且须在当日完成酶活性测定。