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T细胞亚群SAP法检测试剂盒
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试剂盒内容： |
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T细胞亚群SAP法检测试剂盒 标本染色： |
1. 充分干燥（室温2小时以上或过夜）的细胞涂片先用记号笔在标本外画圈，然后滴加固定液50μl，室温静置2-3分钟，用PBS淋洗，擦干玻片背面及细胞外的PBS。 *以下反应均需在湿盒中进行。 2. 分别滴加抗人CD3、CD4、CD8单抗适量（10-30μl）， 4℃过夜，PBS淋洗3次。 3. 滴加生物素标记抗小鼠IgG适量（10-30μl），37℃孵育30-45分钟，PBS淋洗3次。 4. 滴加碱性磷酸酶标记链霉卵白素适量（10-30μl）37℃孵育30-45分钟，PBS淋洗3次。 5. 滴加显色剂30-50μl，室温显色20-40分钟。可在显微镜下观察，待细胞膜上出现红色标记物时，用PBS淋洗。 6. 滴加细胞核复染液30-50μl，30秒后自来水淋洗。 7. 滴加封片剂，盖片封片，镜检。如不需保存亦可用水替代封片剂盖片镜检。 |
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| 标本制备： | 取肝素抗凝（25μl/ml）的静脉血1~2ml，PBS稀释1-2倍后，沿装有等量淋巴细胞分离液的试管壁混匀缓慢加至液面上层，保持两种液体界面清晰，离心（2000转/分）15-20分钟，吸取两液面交界处的单个核细胞层，加5倍PBS，离心（1000转/分）5分钟，弃上清液，沉淀即为单个核细胞。利用试管中剩余的少许回流液体（约一滴）混匀细胞，制成单个核细胞悬液。滴30μl细胞悬液于载玻片上，静置2分钟使细胞下沉粘附于玻片上，吸去液体，快速吹干或37℃温箱1小时烤干。或用PBS将单个核细胞调至2×105个/ml，离心涂片机1000转离心1-2分钟制片，快速吹干或37℃温箱1小时烤干。涂片前取防脱片剂5-10μl均匀推片，亦可用棉签粘取防脱片剂均匀涂于干净玻片上，待干后制备细胞涂片，以防掉片。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 观 察： | 高倍镜下选取染色好的视野记数100-200个单个核细胞，细胞表面有红色标记物为阳性细胞。算出阳性率。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 正常参考值： | 正常人外周血中，阳性细胞百分率一般在：CD3，60-80%；CD4，35-55%；CD8，20-30%；CD4/CD8的比值在1.5-2.0范围内。 |
T细胞亚群SAP法检测试剂盒