品牌:2093
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特别提示:包括MLV逆转录酶在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:MLV逆转录酶
英文名称:MLV Reverse Trans
产品货号:MT0013
产品规格:10KU|50KU
MLV逆转录酶是我司在鼠源病毒反转录酶基础上进行改良而得的第四代反转录酶,可耐受55℃高温反应。相比于传统42℃条件下反转录反应,采用55℃反转录可更好地打开RNA二级结构,从而提高复杂RNA模板的扩增性能、提高反转录cDNA的长度和产量,因此能更好地提高后续检测的灵敏度。此外,MLV反转录酶通过定点突变去除了RNase H活性,从而避免反转录过程中降解RNA。同时经过突变文库筛选,使得其热稳定性更强。
产品组成:
组分 | MT0013-10000U | MT0013-50000U |
MLV逆转录酶(200U/μl) | 50μl | 250μl |
10×RT Buffer | 500μl | 1ml×2 |
储存:-20℃可保存2年。
单位定义:以poly(rA)为模板、oligo(dT)为引物,在37℃条件下,10分钟内催化1nmol的dTTP掺入形成酸不溶性沉淀物所需要的酶量,定义为一个活性单位。
操作方法:
1.按以下组分配制反应体系:
加入物 | 加入量 |
MLV Reverse Trans | 0.5-1μl |
10×RT Buffer | 2μl |
dNTP Mixture(10 mM each) | 1μl |
Total RNA or Poly(A) RNA | 0.1-2μg |
20×Oligo dT(25)&Random Primer * | 1μl |
RNase Inhibitor(40 U/μl) | 0.5μl |
RNase-Free H2O | Up to 20μl |
*注:Oligo dT(25) 使用浓度为 20~50μM, 如使用Random9随机引物可使用125μM,基因特异性引物可使用5μM。
2.在PCR 仪上按下列条件进行反转录反应:
30℃——————15 min
55℃——————30~60 min
85℃——————10 min
4℃
3.反转录所得的cDNA 可直接用于 PCR 反应或储存于-20℃。
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货号 | 名称 | 规格 |
SV0105 | BbvI限制性内切酶 | 1500U|300U|150U |
SV0310 | DraI限制性内切酶 | 10KU|5KU|1KU |
SV0433 | Hpy188III限制性内切酶 | 2500U|500U |
SV0535 | NheI限制性内切酶 | 5KU|5KU|1KU|500U |
SV0561 | NruI限制性内切酶 | 5KU|5KU|1KU|1KU|500U |
SV0584 | PciI限制性内切酶 | 1KU|200U |
SV0639 | RsaI限制性内切酶 | 5KU|1KU|500U |
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名称:Taq DNA聚合酶
货号:BTN51206
规格:500U
本产品是Thermus aquaticus(水生栖热菌)的DNA聚合酶基因在E. coli中表达而得,具有以双链DNA为模板的5′→3′聚合酶活性和5′→3′外切酶活性。Taq DNA聚合酶长为832个氨基酸,分子量为94 Kd。该酶可以广泛用于PCR,RT-PCR,加尾反应等。
产品特点:
1.耐热DNA聚合活性,该酶在90℃以上几乎无DNA合成,在75~80℃时延伸率约150个核苷酸,70℃时为60个核苷酸/秒,55℃时为24个核苷酸/秒。在65~68℃并有Mn2+存在时还具有逆转录活性。
2.热稳定,在PCR混合物中95℃保温40分钟仍可保持50%的活性。
3.Mg2+离子依赖性,MgCl2浓度在2.0mM时该酶催化活性zuì高。
4.本酶无3′→5′外切活性,不具3′→5′校对功能,碱基错配机率为2.1×10-4。
产品组成:
成分 | 规格 |
Taq DNA聚合酶(5U/μL) | 20μl |
10×PCR Buffer(含Mg2+) | 1ml |
MgCl2,25mM | 1ml |
说明书 | 1份 |
储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期一年。
使用方法:(以λDNA为模板进行PCR扩增反应为例)
1.按下列组份配制PCR反应液。
Taq DNA聚合酶(5U/μl) | 0.25μl |
10×PCR Buffer(含Mg2+) | 5μl |
MgCl2(25mM) | 根据需要补加 |
自备dNTP(各2.5mM) | 4μl |
模板DNA | 见下 |
引物1(20μM) | 1μl |
引物2(20μM) | 1μl |
灭菌蒸馏水 | Up to 50μl |
注:10×PCR Buffer含15mM MgCl2(在PCR体系中的终浓度为1.5mM),是否需要补加MgCl2根据实验决定。但一般不需要补加。
推荐50μL PCR反应体系中模板DNA推荐使用量
哺乳动物基因组DNA | 0.5-1μg |
酵母基因组DNA | 5-500ng |
细菌基因组DNA | 0.5-50ng |
质粒DNA | 5-500pg |
PCR回收片段 | 1-100pg |
2.PCR反应条件
以λDNA为模板,扩增1kbp的DNA片段的PCR反应条件如下:
注:PCR反应条件视模板、引物等的结构条件不同而各异。在实际操作中需根据模板、目的片段的大小、碱基序列和引物的长短等具体情况,设定zuì佳的反应条件(温度、时间等)。
注意事项:
PCR的反应液请在冰中配制,然后置于PCR反应仪上进行PCR反应。这种冷启动法可增强PCR扩增的特异性,减少PCR过程中的非特异性反应,能得到良好的PCR结果。