品牌:2094
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特别提示：包括T4 RNA连接酶II（截短型)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
产品名称：T4 RNA连接酶II（截短型)
英文名称：T4 RNA Ligase 2,Truncated
产品货号：WH0164
产品规格：500U
T4 RNA连接酶II（截短型）可特异性催化5"-P腺苷化的DNA或RNA与RNA的3"-OH连接。本产品不需ATP来发挥活性，但需要供体底物的5"-P腺苷化。通过对野生型蛋白的截短改造，使得本产品失去了对非腺苷化5"-P的DNA或RNA与RNA3"羟基的连接活性，因此，如果供体5"-P进行腺苷化修饰，那么应用本产品可特异性的将其连接到受体RNA的3"端，从而可zuì大限度的减少非目标连接产物的背景。本产品通过大肠杆菌重组表达。包含野生型蛋白的N端249个氨基酸残基，分子量约为30.5kDa。本制品浓度为5U/μl。
产品特点：
·特异的催化5"-P腺苷化的DNA或RNA与RNA 3"-OH的连接，背景更低；
·蛋白比活性高，稳定性好。
产品组成：
| 组成 | WH0164 |
| T4 RNA Ligase 2,Truncated | 500U |
| 10×T4 RNA Ligase 2,Truncated Buffer | 1.5ml |
储存条件：-25℃～-15℃保存。
贮存液成分：10mM Tris-HCl，100mM NaCl，0.1mM EDTA，0.1mM DTT，50%甘油。
适用范围：
1．在二代测序（ NGS ）应用中，主要用于miRNA文库构建中RNA的3"端接头的连接。
2．5"-P腺苷化的DNA或者RNA标签与任何种类RNA的3"端连接。
单位定义：
在1×T4 RNA Ligase 2,Truncated Buffer反应液中，20μl反应体系下，37℃，30min内使0.4μg等摩尔比的5"FAM标记的17nt单链RNA与5"腺苷化的18 nt单链DNA连接50%时，所需要的酶量定义为1个活性单位（U）。
质量控制：
| 性质 | 描述 |
| 蛋白纯度 | ＞99% |
| 酶活性 | 30,000U/mg |
| 单链核酸外切酶 | 50 U酶中，＜5.0% |
| 双链核酸外切酶 | 50 U酶中，＜1.0% |
| 双链核酸内切酶 | 50 U酶中，未检出 |
| 宿主基因组污染 | 50 U酶中，＜10拷贝 |
| 非特异性RNase残留 | 50 U酶中，未检出 |
使用方法：
在NGS文库构建过程中，一般按终浓度0.05~0.25 U/μl的量加入T4 RNA连接酶2（截短型）。也可根据实验具体情况来调整用量。
反应条件：25℃，60 min。
灭活条件：65℃，20 min。
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名称：Klenow片段
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Klenow片段是大肠杆菌聚合酶I(E.coli.DNA polymerase I)的大片段(Large Fragment)。来源于大肠杆菌表达，表达基因的来源为polA 基因片段。
Klenow片段保留了DNA聚合酶I的5"→3"聚合酶活性和3"→5"外切酶活性，但缺少完整的Klenow酶的5"→3"外切酶活性。Klenow Fragment的3"→5"外切酶活性保证了其合成DNA时的准确性(proofreading)。
特点：对于5"突出或3"突出的粘末端都可以催化产生平末端，用于后续的平端连接。
用途：双链DNA 5"突出(5"overhang)末端的补平(fill-in)；双链DNA 3"突出(3"overhang)的打平(也称削平)；5"突出末端的标记；随机引物法进行DNA标记；Sanger双脱氧法进行DNA测序；cDNA第二链的合成或定点突变反应第二链的合成。
分子量：约68kDa(单体)。
活性定义：37℃30分钟时间内，催化10nmol脱氧核糖核苷酸(dNTPs)摻入到多聚核苷酸中所需的酶量定义为1个活性单位。
酶活性检测条件：67mM potassium phosphate(pH7.4)，6.7mM MgCl2，1mM 2-mercaptoethanol，0.033mM dATP，0.033mM dTTP，0.4MBq/ml[3H]-dTTP，62.5μg/ml poly(dA-dT)·poly(dA-dT)。
纯度：不含DNA内切酶，不含RNase。
酶储存溶液：25mM Tris-HCl(pH7.5)，0.1mM EDTA，1mM DTT，50%(v/v)glycerol。
Reaction Buffer(10X)：500mM Tris-HCl(pH8.0 at 25℃)，50mM MgCl2，10mM DTT。
储存条件：-20℃