QN1070 植物蛋白提取试剂盒
2023-04-19 17:09  点击:157
价格:未填
品牌:2094
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特别提示:包括植物蛋白提取试剂盒在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!


产品名称:植物蛋白提取试剂盒
产品货号:QN1070
产品规格:50T|100T

植物蛋白提取试剂盒用于植物组织中提取总蛋白,试剂盒中的裂解液含有蛋白酶抑制剂,作用温和,可快速获得总蛋白,可用于免疫印迹实验等基础研究实验,由于含有上述的酶抑制剂,不能用于研究蛋白激酶的研究。

试剂盒组成:
裂解液————————————————100ml
蛋白酶抑制剂(100x)——————————1ml
PMSF(100x)——————————————1ml

操作方法:
1、植物组织蛋白的提取
(1)去100-200mg的植物组织放入液氮中(zuì好过夜),在液氮环境中将植物组织碾碎(越碎越好);
(2)加入1ml的裂解液,4℃裂解20min,期间每隔5min震荡1次;
(3)4℃,14000转离心30min;
(4)吸取上清至新的管中;
(5)进行蛋白定量或者变性进行蛋白实验。
(提取好的蛋白建议保存于-80℃,即用即取,避免反复冻融,避免长时间储存。)

注意事项:
1、实验过程,所有试剂都要需要预冷或者即融,保证操作过程中的低温环境;
2、PSMF(有毒)现用现加,因为PMSF在水溶液中会快速降解;

储存条件:-20℃

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名称:Bradford法蛋白定量试剂盒
货号:BTN80814
规格:100mL
Bradford法测定蛋白质浓度是zuì为常用的蛋白检测方法之一,在酸性条件下,考马斯亮蓝染料能与蛋白质结合形成复合物,其zuì大吸光值也由465nm转移到595nm,通过颜色的强弱测定蛋白质浓度的高低。本产品是基于Bradford法蛋白检测原理开发的产品。

产品特点:
1.快速,10-20个样品只需要10分钟即可完成测定。
2.稳定,加样混匀后2分钟既可测定,1小时内吸光度变化不超过10%。
3.线性范围在 50~1000μg/mL。
4.zuì小测量体积为1-20μL,zuì低测量蛋白量为0.5μg。
5.即开即用,不需要单独购买每个成分再配制。
6.有常规和微量两种检测模式。
7.不受大部分样品中的化学物质的影响。巯基乙醇的浓度可高达1M,二硫苏糖醇的浓度可高达5mM。
8.但受略高浓度的表面活性剂影响,各种蛋白质与染料的结合效率可能有差异。

试剂盒组成:
成分 规格
溶液A 100ml
BSA标准(2mg/mL) 1ml
滤纸 20张
说明书 1份


储存条件:常温运输和保存,BSA 标准-20℃保存,有效期一年。

使用方法:

一、常规检测流程:
此方法在蛋白浓度30-1000μg/mL范围内呈现R2 = 0.996的直线线性回归,可定量蛋白浓度在此范围内的蛋白样品。
1.制备 1×工作液。溶液A与无菌水按1:4 比例充分混合即为1×工作液(例:4mL溶液A+ 16mL 无菌水 = 20mL 1×工作液)。
2.滤纸过滤。过滤后的工作液室温条件下可稳定使用1-2 星期。
3.检测:蛋白样品与1×工作液按1:50 比例混合(例:100μl蛋白样品 + 5mL 1×工作液,适用于3mL的比色杯;40μl蛋白样品 + 2mL 1×工作液,适用于1mL的比色杯;20μl蛋白样品 + 1mL 1×工作液,适用于平底透明96孔板)。
4.加样后,充分混匀。
5.室温放置5分钟。
6.检测吸光度。波长设定 = 595nm。
注意事项:
1.不同型号、规格的滤纸,具有不同的孔径,导致可通过的分子各不相同。请使用本公司提供的滤纸,否则会导致不同的测定结果。
2.检测样品之前,应先制备蛋白标准曲线。一般可使用BSA。
a)常规检测:建议使用下述浓度的BSA。
 0μg/mL、31.25μg/mL、62.5μg/mL、125μg/mL、250μg/mL、500μg/mL、750μg/mL、1000μg/mL
b)微量检测:建议使用下述浓度的BSA。
 0μg/mL、2.5μg/mL、5μg/mL、7.5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL。
3.检测细胞提取物或纯化蛋白样品,应使用相应的缓冲液制备蛋白标准曲线。
4.用 96孔板测定时,应确保没有气泡,否则会增加吸光度的读数。
5.此检测试剂不受大部分样品中的化学物质的影响。巯基乙醇的浓度可高达1M,二硫苏糖醇的浓度可高达5mM。但受略高浓度的表面活性剂影响。若SDS高于0.1%,TritonX-100高于0.1%,Tween20,60,80高于0.06%,可取少量样品加水稀释到适当浓度,再行测定。

二、微量检测流程:
此方法在蛋白浓度1~20μg/mL范围内呈现R2=0.992的直线线性回归,可定量蛋白浓度在此范围内的蛋白样品。
1.蛋白样品与溶液A按4:1比例混合,例:
蛋白样品 溶液A 适用性
400μL 100μL 平底透明96孔板
2mL 0.5mL 1mL的比色杯
4mL 1mL 3mL的比色杯

2.加样后,充分混匀。
3.室温放置5分钟。
4.检测吸光度。波长设定= 595nm。
注意事项:
1.Bradford蛋白浓度测定的显色反应受许多去污剂的影响。应避免使用SDS,Triton X-100,Tween等溶解蛋白样品。对于难溶解的蛋白样品,可用1MNaOH 溶解和稀释。
2.Bradford蛋白浓度测定的显色反应依赖于蛋白中精氨酸残基的数目,因此不同蛋白间测定的差异可能较大。
3.标准品曲线配制时,如果吸量不准确或者加样枪不会造成标准曲线相关系数减小,可根据需要使用倍比梯度稀释的方法来配制,或者使用度高的加样枪。
4.由于Bradford法在蛋白浓度增高到一定时候,颜色反应并不成比例增加,因此得到的标准曲线只是在一定范围内可以近似看成直线,每次应按照实际测得的标准曲线计算出相对的蛋白浓度。
5.不像其它一些蛋白浓度测定方法(包括Lowry法),Bradford法测定蛋白浓度不受大部分样品中的化学物质的影响。样品中巯基乙醇的浓度可高达1M,二流苏糖醇的浓度可高达5mM。但受略高浓度的去垢剂影响。需确保SDS低于0.125%,Triton X-100低于0.125%,Tween 20低于0.06%,可以考虑用超纯水稀释,透析/除盐,ACETONE/TCA沉淀蛋白后重溶于超纯水等方法来消除干扰物质的影响。
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