品牌:2094
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特别提示：包括Pfu DNA Polymerase在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
产品名称：Pfu DNA Polymerase
英文名称：Pfu DNA Polymerase
产品货号：WE0107
产品规格：500U
Pfu DNA Polymerase是通过大肠杆菌表达纯化的重组酶，具有5"-3"DNA聚合酶活性和5"-3"外切核酸酶活性的同时具有3"-5"外切核酸酶活性，因此在DNA扩增过程中具有纠错能力，是目前发现的错配率zuì低的耐高温DNA Polymerase。该酶与Taq DNA Polymerase相比具有更好的热稳定性，对于高GC含量模板，提高变性温度对它活性无影响。使用本产品扩增得到的PCR产物的3"端不带有“A”碱基，不能直接用于T/A克隆，如需进行T/A克隆则需要在其末端添加“A”或用平末端载体进行克隆。本产品适用于基因克隆、基因定点突变、SNP和末端补平等实验。
产品组成：
| 组份 | 500U |
| Pfu DNA Polymerase, 5 U/μl | 100μl |
| 10×PCR Buffer | 1.8ml |
注意：本产品的10×PCR Buffer中含有15 mM镁离子。
活性定义：
用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，在74℃，30分钟内，将10 nmol脱氧核苷酸掺入到酸性不溶物质所需的酶量定义为1个活性单位(U)。
质量控制：
1、经过多次柱纯化，SDS-PAGE检测其纯度大于99%；
2、经检测无外源核酸酶活性；
3、PCR方法检测无宿主残余DNA；
4、能有效地扩增人基因组中的单拷贝基因；
5、室温存放一个月，无明显活性改变。
使用方法：
以下举例为以人基因组DNA为模板，扩增1 kb的片段的PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。
1、PCR反应体系
| 试剂 | 50μl反应体系 | 终浓度 |
| 10×PCR Buffer | 5μl | 1× |
| dNTP Mix，10 mM each | 1μl | 200μM each |
| Forward Primer，10μM | 2μl | 0.4μM |
| Reverse Primer，10μM | 2μl | 0.4μM |
| Template DNA | <0.5μg | <0.5μg/50μl |
| Pfu DNA Polymerase, 5 U/μl | 0.5μl | 2.5 U/50μl |
| ddH2O | up to 50μl |
注意：
1)用Pfu酶扩增时，引物的纯度要求较高，引物长度大于18个碱基，引物浓度请以终浓度0.1-1.0μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。
2)Pfu酶3"-5"外切酶活性可能降解引物，所以应先加dNTP后，再加Pfu酶到反应体系中，并立即进行PCR反应。
2、PCR反应条件
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 预变性 | 94℃ | 2 min | |
| 变性 | 94℃ | 30 s | 25-35 个循环 |
| 退火 | 55-65℃ | 30 s | |
| 延伸 | 72℃ | 60 s | |
| 终延伸 | 72℃ | 5 min |
注意：
1)Pfu酶的热稳定性比Taq酶好，对于GC含量很高的模板，变性温度可以提高到98℃，对Pfu酶的活性无影响。
2)一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃，无法得到理想的扩增效率时，适当降低退火温度；发生非特异性反应时，提高退火温度，由此优化反应条件。
3)Pfu酶具有3"-5"外切酶活性，所以Pfu酶扩增时延伸速度远比Taq酶低，延伸时间根据所扩增片段大小设定，本产品的扩增延伸速率为1 kb/min。
4)可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太多，错配机率会增加，非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。
5)本产品具有3"-5"外切核酸酶活性，PCR产物3’端不带“A”,不能直接用于T/A克隆，如需进行T/A克隆则需要在其末端添加“A”或用平末端载体进行克隆。
储存条件：-20℃，避免反复冻融。
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名称：PCR级高GC的DNA清除剂
货号：BTN61203
规格：1.5mL
本产品是我司开发的专门用于富含GC的DNA模板扩增的试剂。
产品特点：
1.，使用效果普遍好于常规的添加DMSO和甜菜碱的方法。
2.可以处理GC含量高达80%的DNA模板。
3. 操作简单，将本产品用于溶解DNA沉淀即可使用。
储存条件：常温运输及保存，有效期一年。
使用方法：
将乙醇沉淀的高GC DNA直接溶解在适量的本产品中，充分吹打均匀，然后直接将DNA加入PCR反应体系中进行PCR反应。加入的DNA溶液zuì好不要超过PCR终体积的1/10。剩余的DNA可以长期保存。
名称：核酸稀释液，测OD专用
货号：BTN131179
规格：250mL
测定核酸的OD需要一定的pH和盐浓度，本产品就是根据这一特点开发的、专门用于溶解和稀释核酸样品的溶液。
储存条件：常温运输和保存，有效期一年。
名称：PCR试剂盒(含YT Taq酶，Buffer，dNTP，上样液)
货号：YT381
规格：400次
本PCR试剂盒带有YT Taq DNA Polymerase（YT373）、PCR buffer、dNTP和上样缓冲液，自备模板和引物即可进行PCR反应，适合用于各种常规PCR以及T载体克隆、点突变等，能在扩增DNA模板的情况下同时保证高保真性。本试剂盒用于50微升的PCR反应体系，足够用于160个反应，用于20微升的PCR反应体系，足够用于400个反应。
产品组份：
YT Taq DNA Polymerase (5U/μl)————200U
10×Taq Buffer (with Mg2+)——————1ml
dNTP (2.5mM each)——————————0.7ml
6×DNA Loading Buffer————————1ml×2
储存条件：-20℃
名称：cDNA第二链合成试剂盒
货号：YT398
规格：10次
本试剂盒是一种在合成了cDNA链的基础上去除RNA-DNA杂合链中的RNA链并合成cDNA第二链，zuì终形成双链cDNA的试剂盒。本试剂盒包含了进行cDNA第二链合成所需的各种试剂。
本试剂盒采用RNase H使RNA-DNA杂合链中的RNA产生切口，此时DNA Polymerase I可以通过切口平移(nick translation)反应催化形成cDNA第二链。
使用本试剂盒合成的双链cDNA，可以直接用于后续的常规PCR、real-time PCR、cDNA文库的构建等。
本试剂盒用于体积为20微升的cDNA链合成反应的后续反应时，足够进行20个cDNA第二链样品的合成。
产品组份：
RNase H(1U/μl)————————10μl
DNA Polymerase I(10U/μl)———30μl
Reaction Buffer(10X)——————100μl
储存条件：-20℃。
注意事项：
1）进行第二链合成时，dNTP比较适当的zuì终浓度约为0.2mM。如果zuì终浓度过低，在反应体系中需要适当补充dNTP。
2）如果希望获得平末端的双链cDNA，可以用T4 DNA Polymerase(YT403)或DNA末端平滑试剂盒(YT404)处理。
3）酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上，使用完毕后宜立即放置于-20℃保存。
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