品牌:2094
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特别提示:包括热稳定腺苷化DNA/RNA连接酶在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:热稳定腺苷化DNA/RNA连接酶
英文名称:Thermostable 5’AppDNA/RNA Ligase
产品货号:MT0058
产品规格:10T|100T
5"App DNA/RNA热稳定连接酶来自嗜热碱甲烷杆菌(Methanobacterium thermoautotrophicum),是RNA连接酶催化亚基的赖氨酸点突变体。该热稳定DNA/RNA连接酶催化的连接反应不依赖于ATP,但需要5’预腺苷化的接头才能将其连接到RNA或单链DNA的3’OH末端。该酶也可催化3’端被2’-O-甲基化的RNA和5’预腺苷化接头的连接反应。连接反应的zuì适反应温度为 60~65℃。即使在ATP存在的情况下,该连接酶也不能使RNA或单链DNA的5’端磷酸发生腺苷化,因此降低非特异性的串联和环化。该酶为热稳定型,zuì佳反应温度为 65℃,此温度下降低了RNA的二级结构,大大提高连接效率。
产品组成:
组分 | 10T |
Thermostable 5’AppDNA/RNA Ligase(20pmol/μl) | 20μl |
10×App DNA/RNA Ligase Buffer | 100μl |
50 mM MnCl2 | 100μl |
储存条件:-20℃可保存3年。
产品应用:
·二代测序文库构建中连接单链DNA和腺苷化的DNA接头。
·构建小RNA二代测序文库,可在较高温度下连接预腺苷化的接头和RNA。
注意事项:
1.1× AppDNA/RNA Ligase Buffer:10mM Bis-Tris-Propane- HCl pH 7.0,10mM MgCl2,1mM DTT。
2.该酶只能连接5’-端预腺苷化的Oligo接头到单链DNA或RNA的3’-OH基团。
3.当腺苷化底物的5’-端个碱基为“C”时,连接效率较差。
使用方法:
1.配制如下反应体系
ssDNA/RNA Substrate------------20 pmol
5"App DNA Oligonucleotide---------40 pmol
10× AppDNA/RNA Ligase Buffer-------2μl
50 mM MnCl2(for ssDNA ligation only)---2μl
Thermostable 5’AppDNA/RNA Ligase-----2μl
ddH2O Up to 20 ul
2.65℃ 孵育 1h。
3.95℃ 3min,终止反应。
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