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特别提示:包括大肠杆菌TKB1化学感受态细胞在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:大肠杆菌TKB1化学感受态细胞
英文名称:E.coli TKB1 Chemical Competent Cell
产品货号:BTN160688
产品规格:0.1mL*10
大肠杆菌TKB1感受态细胞是由BL21(DE3)衍生而来,含有酪氨酸激酶(TyrosineKinase)。BL21(DE3)TK感受态细胞,简写为TKB1,带有T7 RNA聚合酶的染色体拷贝,该基因的启动子是LacUV5。本产品作为E.coli B 宿主菌,主要用来进行蛋白表达,细胞内缺少lon蛋白酶和ompT外膜蛋白酶,能够有效避免目的蛋白的降解。
本产品通过IPTG 诱导表达的T7 RNA聚合酶,允许其下游目的蛋白表达,从而实现对下游目的蛋白的可控诱导型基因表达。TKB1感受态细胞内含有一个能有诱导表达酪氨酸激酶基因的质粒(pTK)。TKB1感受态细胞能够转化进去ColE1 Origin 为复制起点的,包含有编码磷酸化目的基团或者蛋白的质粒。如果目的蛋白是构建在一个含有亲和标签的融合表达载体上面,那么对于磷酸化蛋白的纯化就会相对比较容易。从TKB1感受态细胞中纯化得到的目的蛋白,能够用来筛选表达库,或者亲和纯化和蛋白印记酪氨酸磷酸化蛋白。
菌种的基因型为:F-dcm ompT hsdS(rB-mB-)gal λ(DE3)[pTK Tetr]。
储存条件:干冰运输、-80℃保存,有效期半年。
自备试剂:目的DNA、SOC或LB培养基等。
使用方法:
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μl,可以根据实际情况分装使用。
以下实验以50μL感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞处于冰水混合状态时,向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA,通常100μl感受态细胞能够被10-100 ng超螺旋质粒DNA 所饱和),用移液器轻轻吹打混匀,冰浴25分钟。
3. 42℃热击45秒,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2-3分钟,晃动会降低转化效率。
4. 每个离心管中加入450μl 无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃摇床,200rpm 振荡培养60分钟使菌体复苏。
5. 根据实验需求,取适量已转化的感受态细胞,加到含有相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于37℃倒置培养12-16小时。
注意事项:
1. 混入质粒或连接产物时应轻柔操作。
2. 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA 总量较多,可取少量转化产物涂布平板;若转化的DNA 总量较少,可取200-300μl转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少,可通过离心(5000rpm,1分钟)收菌后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于平板中。
3. 新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
4. 涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。
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