产品组成
A4004S
A4004M
2×SYBR Green PCR Master Mix
1ml
5×1ml
储存条件：
本产品-20℃保存有效期至少一年，4℃可保存3个月。解冻后应充分混匀，避免产生大量气泡。避光保存。-20°C保质期两年。2-8°C保质期三个月。避免反复冻融。
试剂原理：
本产品利用热启动酶HS Taq DNA polymerase 进行 qPCR 扩增反应，通过扩增产物嵌合SYBR Green I 而激发的荧光信号强度进行检测。
1、 PCR
PCR 法是以微量 DNA 进行目的片段扩增的方法。通过 DNA 链的热变性、引物退火、
DNA 聚合酶作用下引物的延伸三个步骤循环往复，可在短时间内扩增大量 DNA 片段。
2、 荧光检出
SYBR Green I 是一种结合与小沟中的双链 DNA 结合染料，与双链 DNA 结合后，其荧光大大增强，大吸收波长约为 497nm，发射波长大约为 520nm。
SYBR Green I 可以与所有的双链 DNA 相结合，无需使用探针，即可实现检测，通用性好，且灵敏度很高。但是，由于 SYBR Green I 与所有的双链 DNA 相结合，因此由引物二聚体、单链二级结构以及错误的扩增产物引起的假阳性会影响定量的性。在定量仪器检测过程中，可以通过测量升高温度后荧光的变化，由解链曲线来分析产物的均一性，从而区分产物的溶解峰温度而区分特异与非特异的产物。
使用方法：
反应条件
1、 两步法
热启动：95℃ 10 分钟；
变 性：95℃ 10～20 秒；
退火/延伸：60℃ 20～60 秒。
溶解曲线分析。
2、 三步法
热启动：95℃ 10 分钟；
变 性：95℃ 10～20 秒；
退 火 ：56-64℃ 10～30 秒
延 伸：72℃ 10～60 秒。溶解曲线分析。
对于 Roche LightCycler480，热启动时间应采用 10min，ABI7500 也可以采用 5min 热启动。
qPCR反应体系配制：
建议的模板量 10～100ng（基因组 DNA）或 1～10ng（cDNA 模板）。
试剂
20μl 体系
50μl 体系
终浓度
2×SYBR Green PCR Master Mix
10μl
25μl
1×
Primer 1（10μM）
0.4～2μl
1～5μl
0.2～1.0μM
Primer 2（10μM）
0.4～2μl
1～5μl
0.2～1.0μM
Template DNA
4μl
10μl
ddH2O
Total volume
20μl
50μl
比对qPCR试剂合的性能与特点
?
1.比对品牌qPCR试剂盒这个产品也供应一些临床诊断产品开发的企业，在GMP车间生产，质控与性能更有保证；
2.比对品牌qPCR试剂盒使用热启动酶，不是普通TAQ酶;
3.?性能不逊于进口品牌的；
4.?可提供试用装，比进口很多，比国产的略贵点，不错的；
5.?已提供厦门大学、华侨大学及医学院等科研机构使用。
注意事项：
1、 SYBR Green PCR Master Mix 经过特殊配制，采用热启动酶，具有更高特异性；
2、 对于退火温度较低的引物或超过 200bp 长片段扩增建议采用三步法；
3、 扩增前后要使用专用的区域和移液器，戴手套操作并经常更换，PCR 反应完成后切勿打开反应管。以大限度减少 PCR 产物对样品的污染。