荧光免疫层析法检测
2023-02-08 13:51  点击:820
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金标免疫层析技术快速、简便、稳定性好,有效期可长达2-3年。目前已广泛应用于病毒、细菌、毒品及各种蛋白质的检测,常见的毒品快检产品包括尿液检测卡、唾液检测卡等,检测时间只需5-10分钟,这大大促进了该方法的普及应用。
免疫层析技术(ICA)是一种基于抗原抗体特异性免疫反应的膜检测技术,具有操作简单、快速等特点,广泛应用于临床诊断、环境监测、食品安全,毒品检测等重要领域。毒品免疫层析检测技术通常采用竞争法,该技术以固定有检测线(包被抗原)和质控线(抗抗体)的条状纤维层析材料为固定相,测试液为流动相,标记抗体固定于结合垫,通过毛细管作用使待分析物在层析条上移动。利用抗体抗原反应的高度特异性,通过抗体竞争结合特异性抗原(包被抗原)和样品中可能含有的被检测物(毒品)的原理。传统免胶体金技术虽然简单快速,但灵敏度较差,难以准确定量。荧光免疫层析技术作为一项新型免疫检测技术,既保留了传统胶体金试纸条的现场快速检测优点,又加入了荧光俭测技术的高灵敏度特点,成为提高免疫层析方法检测性能的主要途径之一。
胶体金是一种常用的免疫标记技术,是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原抗体的一种免疫层析技术。试纸条含有被事先固定于膜上测试区的特异性合成抗原(包被抗原),结合垫上含有标记的抗特定毒品的特异性单克隆抗体;测试时,样本滴入检测孔内,样本随之在毛细效应下向上层析。如样本中的毒品浓度低于阈值或者没有待测毒品时,胶体金标记的特异性抗体不能被样本中的毒品全部结合。剩余的胶体金标记的特异性抗体在层析过程中会被固定在测试区(T)上的包被抗原结合,出现紫红色条带。如样本中的待检测毒品浓度高于临界值时,胶体金标记的特异性抗体被样本中的毒品全部结合。因而在测试区内(T)上的包被抗原没有可以结合的特异性抗体,所以不会出现紫红色条带。在质控区内(C)标记的是多克隆抗抗体,无论样本中是否存在待测药物,抗抗体都会与层析过程中的单克隆抗体结合形成紫红色条带。所以质控区内(C)所显现的紫红色条带可以判定样本是否足够,以及层析过程是否正常,同时也作为试剂的内控标准。
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